PCR檢測(cè)試劑盒是酶免疫測(cè)定技能中應(yīng)用較廣的技能。其基本辦法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體外表，使酶符號(hào)的抗原抗體反響在固相外表進(jìn)行，用洗刷法將液相中的游離成分洗除。常用ELISA酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn),法有雙抗體夾心法和間接法，前者用于檢測(cè)大分子抗原，后者用于測(cè)定特異抗體。
此種酶符號(hào)抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無(wú)色的還原型變成有色的氧化型，出現(xiàn)顏色反響。因而，可通過底物的顏色反響來判定有無(wú)相應(yīng)的免疫反響，顏色反響的深淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。
此種顯色反響可通過酶聯(lián)免疫試劑盒檢測(cè)儀進(jìn)行定量測(cè)定，這樣就將酶化學(xué)反響的敏感性和抗原抗體反響的特異性結(jié)合起來，使酶聯(lián)免疫試劑盒辦法成為一種既特異又敏感的檢測(cè)辦法。
PCR檢測(cè)試劑盒操作步驟
1．確認(rèn)本次檢測(cè)所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目。
2．將倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品各0.1ml順次參加一排7孔中，1孔只加樣品稀釋液的作為對(duì)照。處理后的標(biāo)本按100ul每孔參加。
3．酶標(biāo)板加上蓋，37℃反響90分鐘。
4．反響后用自動(dòng)洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體；或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體，再對(duì)著吸水紙拍幾下。洗刷2次。
5．將準(zhǔn)備好的生物素抗體工作液按每孔0.1ml順次參加。37℃反響60分鐘。
6．0.01M TBS或0.01M PBS洗刷3次，每次浸泡1分鐘左右。
7．將準(zhǔn)備好的ABC工作液按每孔0.1ml順次參加。37℃反響30分鐘。
8．0.01M TBS或0.01M PBS洗刷5次，每次浸泡1-2分鐘左右。
9．按每孔0.1ml順次參加TMB顯色工作液，37℃避光反響，反響過程中，要經(jīng)常的觀察，當(dāng)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有顯著的梯度藍(lán)色，后3-4孔差別不顯著時(shí)，即可參加TMB停止液0.1ml/孔。（顯色反響不要超過30分鐘）。
10．用酶標(biāo)儀在450nm測(cè)定O.D.值。
11．依據(jù)樣品的吸光值在坐標(biāo)上找出對(duì)應(yīng)的濃度。用戶也可以使用各種應(yīng)用軟件來核算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了N倍，其實(shí)踐濃度應(yīng)該×N。
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